Q-tizim (genetika) - Q-system (genetics)

Q tizimi a genetik imkon beradigan vosita ifoda eting transgenlar tiriklikda organizm.[1] Dastlab Q tizimi ishlab chiqilgan [2][3] da foydalanish uchun sirka pashshasi Drosophila melanogasterva madaniy sharoitda foydalanish uchun tezda moslashtirildi sutemizuvchilar hujayralari,[2] zebrafish,[4] qurtlar[5] va chivinlar.[6] Q tizimidan foydalaniladi genlar dan qa klaster[7] ning non qo'ziqorinlari Neurospora crassa, va to'rt komponentdan iborat: the transkripsiya faollashtiruvchisi (QF / QF2 / QF2w), the kuchaytiruvchi QUAS, repressor QS va kimyoviy de-repressor kinik kislota. Xuddi shunday GAL4 / UAS[8] va LexA / LexAop,[9] Q tizimi - bu ifodalashga imkon beradigan ikkilik ifodalash tizimi muxbirlar yoki effektorlar (masalan, lyuminestsent oqsillar, ion kanallari, toksinlar va boshqa genlar) ning subpopulyatsiyasida hujayralar ushbu hujayralarni ko'rish yoki ularning funktsiyalarini o'zgartirish maqsadida. Bundan tashqari, GAL4 / UAS, LexA / LexAop va Q-tizim bir-biridan mustaqil ravishda ishlaydi va bir vaqtning o'zida muxbirning istalgan namunasiga erishish uchun yoki bir nechta muxbirlarni hujayralarning turli kichik to'plamlarida ifodalash uchun ishlatilishi mumkin.

Kelib chiqishi

Repressible Q ikkilik ifoda tizimi.

Q tizimi ettitadan ikkitasiga asoslangan genlar ning qa gen klasteri non qo'ziqorinlari Neurospora crassa.[7] Ning genlari qa klaster zamburug'lar tomonidan past glyukoza sharoitida uglerod manbai sifatida ishlatiladigan kinik kislota katabolizmiga javobgardir.[7] Klasterda transkripsiya aktivatori mavjud qa-1F, transkripsiyaviy repressor qa-1Sva beshta strukturaviy gen. The qa-1F oqimining yuqori qismida joylashgan ma'lum bir DNK ketma-ketligi bilan bog'lanadi qa genlar. Kinik kislota mavjudligi o'zaro ta'sirni buzadi qa-1F va qa-1S, shunday qilib transkripsiya faolligini zararsizlantiradi qa-1F.Jins qa-1F, qa-1S va ning DNK bilan bog'lanish ketma-ketligi qa-1F Q tizimining asosini tashkil etadi. Genlarning nomi quyidagicha ishlatilishini soddalashtirish uchun o'zgartirildi: transkripsiya faollashtiruvchisi qa-1F QF sifatida, repressor qa-1S QS sifatida va DNKning bog'lanish ketma-ketligi QUAS sifatida.[2] Kvinik kislota Q tizimining to'rtinchi komponentini anglatadi va asl transaktivator QF keng ifoda etilganda toksik bo'lib tuyuladi. Drosophila. Ushbu muammoni bartaraf etish uchun ikkita yangi transaktivator ishlab chiqildi: QF2 va QF2w[3]

Dan foydalaning Drosophila

Asosiy foydalanish

Q tizimi GAL4 / UAS ga o'xshash va unga bog'liq bo'lmagan holda ishlaydi[8] va LexA / LexAop [9] tizimlar. QF, QF2 va QF2w GAL4 va LexA ga o'xshashdir va ularning ifodasi odatda hujayra tipidagi maxsus promotorning nazorati ostida, masalan nsyb (neyronlarni nishonga olish uchun) yoki tubulin (barcha hujayralarni nishonga olish uchun). QUAS UAS va LexAop bilan o'xshashdir va effektor genining yuqori qismida joylashgan, masalan GFP. QS GAL80 ga o'xshaydi va uni har qanday promouter boshqarishi mumkin (masalan.) tubulin-QS). Kinik kislota Q tizimining o'ziga xos xususiyati bo'lib, uni QS ta'siridagi repressiyani yumshatish uchun uni chivin yoki qurtlarga berish kerak. Ba'zi jihatlarga ko'ra, kinol kislota GAL80 holatidagi haroratga o'xshashdirts.Uning asosiy shaklida ikkita transgenik uchish liniyasi, biri QF transgenini, ikkinchisi QUAS transgenini o'z ichiga oladi. Ularning QF transgeniga va QUAS transgeniga ega bo'lgan nasllari hujayralar to'plamida reportyor genini ifodalaydi (masalan.) nsyb-QF2, QUAS-GFP pashshalar barcha neyronlarda GFPni ifodalaydi). Agar chivin ba'zi hujayralardagi QS ni ham ifoda etsa, QF faolligi bu hujayralarda bostiriladi, ammo u qayta tiklanishi mumkin xinik kislota (masalan, a nsyb-QF2, QUAS-GFP, tub-QS uning dietasida kinik kislota bo'lmaganida fly GFP yo'qligini bildiradi va kinik kislota bilan oziqlanganida neyronlarda GFPni ifodalaydi).[2][3] QS repressoridan va kinik kislotadan foydalanish transgen ekspressionini vaqtincha boshqarishni aniq sozlash imkonini beradi.

Kimyoviy transaktivatorlar

Kimyoviy transaktivatorlar GAL4QF[3] va LexAQF[3] har ikkala ikkitomonlama ifoda tizimlaridan foydalanishni birlashtirishga imkon beradi. GAL4QF UAS bilan bog'lanadi va GAL80 ta'sir qilmasdan QS tomonidan siqib chiqarilishi mumkin. Xuddi shunday, LexAQF LexAop bilan bog'lanadi va QS tomonidan repressiya qilinishi mumkin. LexAQF o'zining repressoriga ega bo'lmagan LexA / LexAop tizimining foydali kengaytmasini aks ettiradi.

Kesishma ifodasi

GAL4 va QF ikkilik ekspression tizimlaridan foydalangan holda kesishgan ekspression naqshlari mumkin.

Uchta ikkilik ekspresiya tizimi va FLP / FRT yoki boshqa rekombinazlarning kombinatsiyasi yordamida turli xil ifoda naqshlariga erishish mumkin.[10] Ifoda naqshlari AND, OR, NOR va boshqalar sifatida tuzilishi mumkin mantiq eshiklari [1][2] masalan. mavjud GAL4 satrlarini ifodalash naqshlarini toraytiring. Olingan ekspresyon modeli, transkriptsiya omillarini faollashtirish vaqtining rivojlanish vaqtiga bog'liq [1]).

Boshqa organizmlarda foydalaning

Q tizimi turli xil organizmlarda muvaffaqiyatli ishlayotgani ko'rinib turdi. U madaniylikda printsipial isboti sifatida lusiferaza ekspresiyasini qo'zg'atish uchun ishlatilgan sutemizuvchilar hujayralari.[2] Yilda zebrafish[4] Q-sistemasi bir nechta to'qimalarga xos promotorlar bilan muvaffaqiyatli ishlatilgan va GAL4 / UAS tizimidan mustaqil ravishda bir hujayradagi ekspluatatsiya qilinganligi ko'rsatilgan. Yilda C. elegans[5] Q tizimining mushaklarda va neyron to'qimalarida ishlashi isbotlangan. 2016 yilda Q-tizimi birinchi marta bezgak chivinlarining hidlovchi neyronlarini nishonga olish uchun ishlatilgan Anopheles gambiae.[6] 2019 yilda Q-tizim Anofellar chivinlar hidga sezgir neyronlarning hidlarga funktsional javoblarini tekshirish uchun ishlatilgan.[11] 2019 yilda Q-tizimi Aedes aegypti chivin, to'qimalarga xos ekspression naqshlarini olish uchun.[12] Ushbu yutuqlar Q-tizimini boshqa organizmlar uchun genetik vositalarni ishlab chiqishda tanlash tizimiga aylantiradi. Hozirgi vaqtda Q tizimining asosiy kamchiligi mavjud transgenik liniyalar sonining kamligidir, ammo ilmiy jamoatchilik ushbu resurslarni yaratishda va ularni baham ko'rishda, masalan GAL4> QF2 HACK tizimidan foydalanib, mavjud GAL4 transgenik konvertatsiya qilishda QF2 ga qo'shimchalar.[13] VP16 transkripsiyali faollashtiruvchi domen bilan birlashtirilgan QF2 ning DNK bilan bog'lanish sohasi muvaffaqiyatli tatbiq etildi Penitsillium ikkilamchi metabolit gen klasterini ishlab chiqaradigan penitsillin ustidan miqyosli ravishda nazoratni qo'lga kiritish. [14]

Adabiyotlar

  1. ^ a b v Riabinina O, Potter CJ (2016). "Q-tizim: drozofila uchun ko'p qirrali ifoda tizimi". Molekulyar biologiya usullari. 1478: 53–78. doi:10.1007/978-1-4939-6371-3_3. ISBN  978-1-4939-6369-0. PMC  5270762. PMID  27730575.
  2. ^ a b v d e f Potter CJ, Tasic B, Russler EV, Liang L, Luo L (aprel 2010). "Q tizimi: transgen ekspressioni, naslni kuzatish va mozaikani tahlil qilish uchun repressiv ikkilik tizim". Hujayra. 141 (3): 536–48. doi:10.1016 / j.cell.2010.02.025. PMC  2883883. PMID  20434990.
  3. ^ a b v d e Riabinina O, Luginbuhl D, Marr E, Liu S, Vu MN, Luo L, Potter CJ (mart 2015). "Genetik manipulyatsiya uchun takomillashtirilgan va kengaytirilgan Q-tizim reaktivlari". Tabiat usullari. 12 (3): 219-22, 5 p 222 dan keyin. doi:10.1038 / nmeth.3250. PMC  4344399. PMID  25581800.
  4. ^ a b Subedi A, Macurak M, Gee ST, Monge E, Goll MG, Potter CJ, Parsons MJ, Halpern ME (aprel 2014). "Zebrafish transgenezi uchun Q transkripsiyasini tartibga solish tizimini qabul qilish". Usullari. 66 (3): 433–40. doi:10.1016 / j.ymeth.2013.06.012. PMC  3883888. PMID  23792917.
  5. ^ a b Vey X, Potter CJ, Luo L, Shen K (2012 yil mart). "Caenorhabditis elegans-da Q repressible binar ekspressiya tizimi bilan gen ekspressionini boshqarish". Tabiat usullari. 9 (4): 391–5. doi:10.1038 / nmeth.1929. PMC  3846601. PMID  22406855.
  6. ^ a b Riabinina O, Vazifa D, Marr E, Lin CC, Alford R, O'Brochta DA, Potter CJ (oktyabr 2016). "Bezgak chivinida xushbo'y hidli markazlarni tashkil etish Anopheles gambiae". Tabiat aloqalari. 7: 13010. Bibcode:2016 yil NatCo ... 713010R. doi:10.1038 / ncomms13010. PMC  5063964. PMID  27694947.
  7. ^ a b v Giles NH, Geever RF, Asch DK, Avalos J, Case ME (1991). "Wilhelmine E. Key 1989 yilgi taklifnoma ma'ruzasi. Neurospora crassa va boshqa qo'ziqorinlarda ka (kinik kislota) genlarini tashkil etish va tartibga solish". Irsiyat jurnali. 82 (1): 1–7. doi:10.1093 / jhered / 82.1.1. PMID  1825499.
  8. ^ a b Tovar AH, Perrimon N (iyun 1993). "Hujayralar taqdirini o'zgartirish va dominant fenotiplarni yaratish vositasi sifatida maqsadli gen ekspressioni". Rivojlanish. 118 (2): 401–15. PMID  8223268.
  9. ^ a b Lay SL, Li T (2006 yil may). "Drosophila-dagi ikkilik binar transkripsiya tizimlari bilan genetik mozaika". Tabiat nevrologiyasi. 9 (5): 703–9. doi:10.1038 / nn1681. PMID  16582903.
  10. ^ Bischof J, Basler K (2008). "Rekombinazalar va ularning genlarni faollashishi, genlarni inaktivatsiyasi va transgenezida ishlatilishi". Molekulyar biologiya usullari. 420: 175–95. doi:10.1007/978-1-59745-583-1_10. ISBN  978-1-58829-817-1. PMID  18641947.
  11. ^ Afify A, Betz JF, Riabinina O, Lahondère C, Potter CJ (oktyabr 2019). "Odatda ishlatiladigan hasharotlarga qarshi vositalar odam hidini Anofel pashshalaridan yashiradi". Hozirgi biologiya. 0: 3669–3680.e5. doi:10.1016 / j.cub.2019.09.007. PMC  6832857. PMID  31630950.
  12. ^ Matthews BJ, Younger MA, Vosshall LB (may, 2019). "Aedes aegypti". eLife. 8: e43963. doi:10.7554 / eLife.43963. PMC  6597239. PMID  31112133.
  13. ^ Lin CC, Potter CJ (avgust 2016). "Drosophila melanogasterda induktiv gen almashtirish bilan transgenik DNK tarkibiy qismlarini tahrirlash". Genetika. 203 (4): 1613–28. doi:10.1534 / genetika.116.191783. PMC  4981265. PMID  27334272.
  14. ^ Mózsik L va boshq. (Noyabr 2019). "Penicillium chrysogenum-da genlarni tartibga solish uchun sintetik boshqaruv moslamalari". Mikrob hujayralari to'g'risidagi fakt. 18 (203). doi:10.1186 / s12934-019-1253-3.