Streptamer - Streptamer
 | Bu maqola kabi yozilgan tarkibni o'z ichiga oladi reklama. (2019 yil may) (Ushbu shablon xabarini qanday va qachon olib tashlashni bilib oling) |
The Streptamer texnologiya antigenga xos bo'lgan qayta tiklanadigan izolyatsiyaga va bo'yashga imkon beradi T hujayralari. Ushbu texnologiya hozirgi T xujayrasini izolyatsiya qilish usulini Strep-teg texnologiya. Printsipial jihatdan T hujayralari bir-biridan qiziqish uyg'otadigan T xujayrasi va markerga konjuge qilingan molekula o'rtasida izolyatsiyani ta'minlaydigan ma'lum bir o'zaro ta'sirni o'rnatish orqali ajralib chiqadi. Ushbu o'zaro ta'sirning qaytaruvchanligi va uning past haroratlarda bajarilishi funktsional T hujayralarini muvaffaqiyatli ajratish va tavsiflash uchun sababdir, chunki T hujayralari fenotipik va funktsional jihatdan davolanmagan hujayralardan ajralib turolmaydi, bu usul klinik va bazaviy yangi strategiyalarni taklif qiladi. T hujayralarini o'rganish.[1]
T hujayralarini tadqiq qilishda klassik usullar
T hujayralari moslashuvchanlikda muhim rol o'ynaydi immunitet tizimi. Ular murakkab immunitet reaktsiyalarini tartibga solish, tartibga solish va muvofiqlashtirishga qodir. Klinik jihatdan muhim jihatlar qatori T-hujayralarining ishlashi yoki ishlamay qolishi bilan bog'liq: Otoimmun kasalliklar, nazorat qilish virusli yoki bakterial patogenlar, rivojlanishi saraton yoki payvandlash O'tgan yillar davomida turli xil usullar (ELISpot tahlillari, hujayra ichidagi sitokinni bo'yash, sekretsiyani tahlil qilish ) T hujayralarini aniqlash uchun ishlab chiqilgan, ammo faqat asosiy gistosayish kompleksi (MHC) protseduralari antigenga xos T hujayralarini ularning funktsional holatidan mustaqil ravishda aniqlash va tozalashga imkon beradi.
Asosan, MHK protseduralari T hujayralari retseptorlari (TCR) ligand, bu MHC-peptid kompleksi, binoni probi sifatida. MHK TCR bilan o'zaro ta'sir qiladi, bu esa o'z navbatida T hujayralarida ifodalanadi. TCR-MHC o'zaro ta'sirlari juda zaif bo'lganligi sababli qarindoshlik monomerik MHC-epitop komplekslari bir-biriga nisbatan barqaror bog'lanishni ta'minlay olmaydi. Ushbu muammoni multimerizatsiya qilingan MHC-epitoplar yordamida hal qilish mumkin, bu esa bog'lanishni oshiradi avidlik va shuning uchun barqaror bog'lashga imkon beradi. Ftorxromlar MHC-multimerlari bilan konjuge qilingan, keyin T hujayralarini identifikatsiyalash uchun foydalanish mumkin oqim sitometriyasi.Hozirgi kunda MHC molekulalari tez o'sib boruvchi kasalliklar bilan tanilgan antigen peptidlari bilan birgalikda rekombinativ tarzda ishlab chiqarilishi mumkin.
Streptamer texnologiyasi
Streptamer magistrali
Streptamerni bo'yash printsipi T hujayralarini MHC-multimerlari bilan ajratishning klassik usulini Strep-teg /Strep-taktin texnologiya. The Strep-tag - bu mo''tadil bog'lanishni ko'rsatadigan qisqa peptidlar ketma-ketligi qarindoshlik uchun biotin - Strep-Taktin deb nomlangan mutatsiyalangan streptavidin molekulasining bog'lanish joyi. Streptamer texnologiyasi uchun Strep-Taktin molekulalari ko'p o'lchovli bo'lib, "umurtqa pog'onasi" ni hosil qiladi va shu bilan strep-etiketli oqsillar bilan bog'lanish uchun maydon yaratadi. Bundan tashqari, Strep-Taktin magistralida oqim sitometriyasini tahlil qilish uchun floresan yorlig'i mavjud. MHC-Strep-tag termoyadroviy oqsillarini Strep-Taktin umurtqa pog'onasi bilan inkubatsiya qilish natijasida T hujayralarini antigenga bo'yashga qodir bo'lgan MHC-multimer hosil bo'ladi.
Qayta tiklanadigan binoni
D-biotin molekulasi Strep-taktinga Strep-tagga nisbatan ancha yaqinligi sababli, u bog'lanish joyi uchun samarali raqobatlasha oladi.[2][3] Shuning uchun Strep-tagning Strep-Tactin bilan o'zaro ta'siriga asoslangan MHC multimeri nisbatan past konsentratsiyali d-biotin mavjud bo'lganda osonlikcha buziladi. Strep-taktin magistralisiz yagona MHC-Strep-tag termoyadroviy oqsillari o'z-o'zidan T xujayrasi TCR dan ajralib chiqadi, chunki zaif bog'lanish affinitlari (monomerik MHC-epitop komplekslari barqaror bog'lanishni ta'minlay olmaydi, yuqoriga qarang).
Adabiyotlar
- ^ Knabel, M., Franz, TJ, Schiemann, M., Vulf, A., Villmow, B., Shmidt., B., Bernhard, H., Vagner, H. va Bush, D. (2002) Qayta tiklanadigan MHC multimeri T-hujayralar populyatsiyasini funktsional izolyatsiyasi va asrab olishning samarali o'tkazilishi uchun bo'yash. Tabiat tibbiyoti 8 (6), 631-637.
- ^ Shmidt TGM va Skerra A, 2007. Bir bosqichli tozalash va oqsillarni yuqori darajaga yaqinligini aniqlash yoki ushlash uchun Strep-tag tizimi. TABIY PROTOKOLLAR 2, 1528-1535.
- ^ http://www.strep-tag.com