Virusni inaktivatsiya qilish - Virus inactivation

Virusli inaktivatsiya to'xtatish uchun viruslar Viruslarni to'liq yo'q qilish yoki ularni yuqumsiz holatga keltirish orqali kerakli mahsulotni ifloslanishidan ma'lum bir namunada. Ushbu usullar oziq-ovqat mahsulotlarida keng qo'llaniladi va qon plazmasi[1] sanoat tarmoqlari, chunki bu mahsulotlarga virus zarralari borligi zarar etkazishi mumkin. Ushbu usullar bilan olib tashlangan eng keng tarqalgan viruslarning ba'zilari quyidagilardir OIV-1 va OIV-2 viruslar; gepatit A, B va C; va parvoviruslar.[2] Ushbu usullar olib tashlash uchun moslangan prionlar, qon mahsulotlaridan, viruslar bilan bog'liq bo'lmagan.[3]

Olib tashlash

Oddiy ravishda virusni yo'q qilish deb ataladigan ushbu umumiy jarayon, ushbu namunadagi barcha viruslar an'anaviy ekstraktsiya yoki [to'liq energiya] usullari bilan yo'q qilinadigan jarayondir. Eng taniqli usullardan ba'zilari quyidagilarni o'z ichiga oladi:

Ushbu ekstraktsiya jarayonlari "an'anaviy jarayonlar" deb hisoblanadi, chunki ular virusga hech qanday ta'sir ko'rsatmaydi; ular shunchaki uni namunadan jismonan olib tashlashadi.

Nanofiltratsiya

Nanofiltratsiya texnikasi yordamida virusni yo'q qilish jarayonlari[4] viruslarni o'lchovni istisno qilish yo'li bilan olib tashlash. Ushbu turdagi jarayon odatda parvoviruslar uchun ishlatiladi[5] va o'z ichiga olgan boshqa viruslar oqsil qatlami. Oddiy OIV virusi 180 nm ni tashkil qiladi va odatdagi parvovirus 15 dan 24 nm gacha o'zgarishi mumkin, bu juda kichikdir. Filtrlashning katta afzalliklaridan biri, harorat va kislotalikning haddan tashqari balandligini o'z ichiga olgan usullardan farqli o'laroq, filtrlash bo'lmaydi denature namunadagi oqsillar. Nanofiltratsiya ko'pgina oqsil turlari uchun ham samaralidir. U kimyoviy tanlanmaganligi sababli, virus zarrachasining sirt kimyosi qanday bo'lishidan qat'iy nazar, nanofiltratsiya texnikasi yordamida virusni yo'q qilish jarayonlari baribir samarali bo'ladi. Ushbu texnikaning yana bir katta afzalligi uning laboratoriya miqyosida bajarilishi va keyinchalik ishlab chiqarish standartlari darajasida samarali ravishda kengaytirilishi. Shunga qaramay, viruslarni yo'q qilish darajasi nanofiltrning teshiklari hajmiga bog'liqligini hisobga olish muhimdir. Ba'zi hollarda juda kichik viruslar filtrlanmaydi. Bundan tashqari, bosim va oqim tezligining o'zgarishi mumkin bo'lgan ta'sirini hisobga olish kerak.

Ushbu turdagi jarayonlarni bajarish uchun ishlatiladigan ba'zi filtrlar Planova 15N,[6] Planova 20N, BioEX, VAG - 300, Viresolve 180,[7] Viresolve 70TM va Virosart[8] oralig'i.

Xromatografiya

Viruslarni yo'q qilishning xromatografik usullari oqsilni tozalash uchun juda yaxshi, shuningdek, barcha turdagi viruslarga qarshi samarali, ammo virusni yo'q qilish darajasi kolonn tarkibiga va bu jarayonda ishlatiladigan reagentlarga bog'liq. Shuni ham ta'kidlash joizki, ushbu jarayonning samaradorligi viruslar orasida juda katta farq qilishi mumkin va ishlatilgan bufer asosida jarayonning samaradorligi o'zgarishi mumkin. Ushbu protsedurani amalga oshirishda partiyalar orasidagi sanitariya ham tashvishga soladi.

Faolsizlantirish

Virusli inaktivatsiya viruslarni yuqtirishga qodir emas. Ko'pgina viruslar o'z ichiga oladi lipid yoki oqsil kimyoviy alteratsiya bilan zararsizlantirilishi mumkin bo'lgan paltolar. Virusli inaktivatsiya virusni yo'q qilishdan farq qiladi, chunki avvalgi jarayonda virusning sirt kimyosi o'zgaradi va ko'p hollarda (hozir yuqumsiz) virus zarralari oxirgi mahsulotda qoladi. Virusni shunchaki nofaol holatga keltirishning o'rniga, ba'zi virusli inaktivatsiya jarayonlari denature virus to'liq. Virusli inaktivatsiya qon plazmasi sanoat.

Namunadagi viruslarning inaktivatsiyasiga erishish uchun virusni qandaydir tarzda kimyoviy o'zgartiradigan "maxsus" tozalash jarayonlarini bajarish kerak. Ko'proq qo'llaniladigan jarayonlarning ba'zilari quyidagilar:

  • Erituvchi / detarjan inaktivatsiyasi
  • Pasterizatsiya (isitish)
  • Kislota pH inaktivatsiyasi

Ba'zi hollarda virusni zararsizlantirish hayotni olib tashlashning muqobil usuli emas, chunki hatto denatura qilingan yoki boshqa usulda faol bo'lmagan virus zarralari ham jarayon oqimiga yoki mahsulotning o'ziga zararli ta'sir ko'rsatishi mumkin.

Erituvchi / detarjan (S / D) inaktivatsiyasi

Tomonidan ishlab chiqilgan ushbu jarayon Nyu-York qon markazi,[9] hozirgi kungacha eng ko'p qo'llaniladigan virusli inaktivatsiya usuli hisoblanadi. Uni asosan qon plazmasi sanoatida, dunyodagi 50 dan ortiq tashkilotlar va Amerika Qizil Xoch [1]. Ushbu jarayon faqat a ichiga o'ralgan viruslar uchun samarali bo'ladi lipid palto, ammo. Ushbu usulda ishlatiladigan yuvish vositalari virusning lipid qoplamasidagi molekulalarning o'zaro ta'sirini to'xtatadi. O'ralgan viruslarning aksariyati lipid qoplamasiz mavjud bo'lmaydi, shuning uchun ushbu yuvish vositalariga ta'sirlanganda yo'q qilinadi. Boshqa viruslarni yo'q qilish mumkin emas, lekin ularni yuqtirishga qodir emas. Erituvchi muhit yaratadi, unda lipid po'sti va detarjan o'rtasidagi agregatsiya reaktsiyasi tezroq sodir bo'ladi. Odatda ishlatiladigan yuvish vositasi Triton X-100.

Triton X-100 kimyoviy tuzilishi (n = 9-10).

Ushbu jarayon "an'anaviy" olib tashlash texnikasining ko'plab afzalliklariga ega. Bu jarayon oqsillarni denaturatsiyalashtirmaydi, chunki yuvish vositalari faqat lipidlar va lipid hosilalariga ta'sir qiladi. Ushbu jarayon natijasida 100% virusli o'lim mavjud va uskunalar nisbatan sodda va ulardan foydalanish oson. Virusdan keyingi zararsizlantiriladigan materialni tozalash uchun mo'ljallangan uskunalar keyingi jarayonlar oqimlarining ifloslanishidan saqlanish uchun kerak bo'ladi.

S / D davolash osonlikcha mavjud bo'lgan va nisbatan arzon bo'lgan reagentlardan foydalanadi, ammo tarqatishdan oldin ushbu reagentlar mahsulotdan olib tashlanishi kerak, bu qo'shimcha jarayonlarni talab qiladi. Ushbu jarayon virusning lipid qoplamasini olib tashlaganligi yoki inaktiv qilganligi sababli, har qanday lipid konvertisiz viruslar ta'sir qilmaydi. Bundan tashqari, tomonidan inaktivatsiya ta'siri yo'q tamponlar ushbu jarayonda ishlatiladi.

Pasterizatsiya

Yordamida viruslarni inaktivatsiyasi pasterizatsiya Agar siz himoya qilmoqchi bo'lgan oqsillar eritmada bo'lgan virusli aralashmalarga qaraganda ko'proq termal chidamli bo'lsa, bu juda samarali bo'lishi mumkin. Ushbu turdagi jarayonlarning eng muhim afzalliklari shundaki, ular oddiy uskunalarni talab qiladi va ular har ikkala konvert uchun ham samarali bo'ladi va zararli bo'lmagan viruslar. Pasterizatsiya eritmaning haroratini virusni etarli darajada denatatsiya qiladigan qiymatga ko'tarishni o'z ichiga olganligi sababli, virusning konvertga ega bo'lishi yoki yo'qligi muhim emas, chunki konvertning o'zi virusni bunday yuqori haroratdan himoya qila olmaydi. Shu bilan birga, viruslar uchun termal stabilizator vazifasini bajaradigan ba'zi oqsillar mavjud. Albatta, agar maqsadli oqsil issiqlikka chidamli bo'lmasa, ushbu texnikadan foydalanish ushbu maqsadli oqsilni va virusli nopoklikni denatatsiya qilishi mumkin. Odatda inkubatsiya 10 soat davom etadi va 60 ° da amalga oshiriladiC.

Kislota pH inaktivatsiyasi

Ba'zi viruslar, past darajaga tushganda pH, o'z-o'zidan denaturatsiya qilinadi. Pasterizatsiya singari, virusni inaktivatsiya qilishning ushbu usuli, maqsadli protein virusning nopokligiga qaraganda past pH darajasiga chidamli bo'lsa foydalidir. Ushbu usul zararli viruslarga qarshi samarali hisoblanadi va odatda ishlatiladigan uskunalar oddiy va oson ishlaydi. Ushbu turdagi inaktivatsiya usuli zararli bo'lmagan viruslar uchun unchalik samarali emas, shuningdek yuqori haroratni talab qiladi. Shunday qilib, ushbu usuldan foydalanish uchun maqsadli protein past pH va yuqori haroratga chidamli bo'lishi kerak, afsuski, ko'plab biologik oqsillar uchun bunday emas. Ushbu jarayon uchun inkubatsiya odatda pH qiymati 4 ga teng bo'lib, 6 soatdan 21 kungacha davom etadi.

Ultraviyole (UV) inaktivatsiyasi

UV nurlari nuklein kislota dimerlarini yaratish orqali tirik organizmlarning DNKlariga zarar etkazishi mumkin. Biroq, zararlar odatda ultrabinafsha nurlarining tirik to'qimalar orqali kam kirib borishi sababli muhim emas. Virus zarrachalari kichik bo'lgani uchun va ultrabinafsha nurlari genetik materialga etib borishi bilan nuklein kislotalarning dimerizatsiyasini keltirib chiqarishi sababli viruslarni zararsizlantirish uchun ultrabinafsha nurlardan foydalanish mumkin. DNK dimerizatsiya qilinganidan so'ng, virus zarralari ularning tarqalishiga to'sqinlik qiladigan genetik materiallarini ko'paytira olmaydi.

Riboflavin bilan birgalikda ultrabinafsha nurlar qon quyish mahsulotlarida patogenlarni kamaytirishda samarali ekanligi isbotlangan.[10][11] Riboflavin va ultrabinafsha nurlar viruslar, bakteriyalar, parazitlar va donor oq qon hujayralaridagi nuklein kislotalarga zarar etkazishi, ularni ko'paytira olmaydi va kasallik keltirib chiqarmaydi.[12][13][14]

Spiking tadqiqotlari

Ko'pgina hollarda, berilgan namunadagi viruslarning konsentratsiyasi juda past. Boshqa ekstraktsiya jarayonlarida past darajadagi nopoklik ahamiyatsiz bo'lishi mumkin, ammo viruslar yuqumli aralashmalar, hatto bitta virusli zarracha ham butun jarayon zanjirini buzish uchun etarli bo'lishi mumkin. Shuning uchun har qanday turdagi eritmadan qanday turdagi virus olinayotgan bo'lsa, uni olib tashlash yoki inaktivatsiya qilish usulini aniqlash uchun maxsus choralar ko'rish kerak.

Spiking tadqiqotlari ushbu maqsad uchun maxsus yaratilgan. Spiking tadqiqot - bu virusni yo'q qilish yoki inaktivatsiyalashning mumkin bo'lgan usullarini aniqlash maqsadida o'tkazilgan tadqiqot. Ushbu tadqiqotlarning natijalari raqamli bo'lib, ushbu raqamlarga asoslanib, tadqiqotchilar tadqiqot olib borilayotgan jarayon ular chiqarmoqchi bo'lgan viruslar va ularni chiqarishga urinayotgan eritma uchun mos keladimi yoki yo'qligini aniqlashlari mumkin. .

Usul

Eksperimentlar natijasida namunaning viruslar sonini (yoki faollik darajasini) 10 baravar oshirishi isbotlandi4 yoki 105 asl nusxada virusni yo'q qilish / inaktivatsiya nisbatlarini faqat bitta kattalikka o'zgartiradi [ma'lumotnoma?]. Ushbu ma'lumotdan viruslar soni (yoki faollashuv darajasi) 10 marta ko'paytiriladigan yoki "bosilgan" spiking tadqiqotlari yaratilgan.4 yoki 105 asl namunadan. Ushbu yangi yuqori raqam yoki faoliyat darajasi keyinchalik jarayon oqimi orqali boshqariladi va tozalanadi. Faoliyat soni yoki darajasi jarayon oqimining boshida va oxirida olinadi va Reduksiya faktorini hisoblashda ishlatiladi.

Kamaytirish omili

Virusni yo'q qilish yoki inaktivatsiya qilish bosqichini kamaytirish koeffitsienti (RF) quyidagi tenglama yordamida hisoblanadi:[15]

RFqadam = log10 [(V1 x T1) / (V2 x T2)]

Bu erda: V1 = tozalash bosqichidan oldin bosilgan xomashyo hajmi; T1 = tozalash bosqichidan oldin boshoqli xom ashyoning virus kontsentratsiyasi; V2 = tozalash bosqichidan keyingi material hajmi; va T2 = tozalash bosqichidan keyin materialning virus konsentratsiyasi.

Jarayonning ma'lum bir oqimi uchun zarur bo'lgan kamayish koeffitsienti turli xil omillarga bog'liq bo'lib, ularning ba'zilari quyidagilarni o'z ichiga oladi:

  • Virusning kutilayotgan dastlabki konsentratsiyasi
  • Mahsulot tozalanmoqda
  • Virusning yuqtiradigan dozasi (uchun jonli ravishda foydalanish)
  • Inaktivatsiya to'liq olib tashlashning munosib alternativasi bo'ladimi
  • Laboratoriya imkoniyatlari
  • Inaktivatsiya yoki olib tashlash usulining nisbiy qiyinligi

Ilovalar

Ushbu texnologiya oziq-ovqat va dori-darmon sanoatida keng qo'llanilgan, ammo virusni qayta ishlashning ba'zi boshqa dasturlari quyidagilar:

  • Havoni tozalash (Millipore) [16]
  • Vaksinalar
  • Virusli namunalarni ekstrakti
  • Suvni tozalash
  • G'arbiy Nil virusini inaktivatsiyasi

Adabiyotlar

  1. ^ Shander A, Lobel GP, Javidroozi M (iyun 2016). "Qon quyish amaliyoti va yuqumli xatarlar". Gematologiyani ekspertizasi. 9 (6): 597–605. doi:10.1586/17474086.2016.1164593. PMID  26959944.
  2. ^ Di Minno G, Perno CF, Tiede A, Navarro D, Canaro M, Gyertler L, Ironside JW (yanvar 2016). "Qon ketishining buzilishi uchun qon / plazmadan olingan mahsulotlar orqali qo'zg'atuvchining yuqishini oldini olish bo'yicha dolzarb tushunchalar". Qon sharhlari. 30 (1): 35–48. doi:10.1016 / j.blre.2015.07.004. PMC  7115716. PMID  26381318.
  3. ^ Turner ML (2018). "Qon, qon hosilalari va plazmadan olinadigan mahsulotlar xavfsizligi". Klinik nevrologiya bo'yicha qo'llanma. 153: 463–472. doi:10.1016 / B978-0-444-63945-5.00026-X. PMID  29887153.
  4. ^ "Nanofiltratsiya". Eurodia.com. Olingan 2010-11-23.
  5. ^ "Viruslarning katta rasmlari - Parvoviruslar". Virology.net. Olingan 2010-11-23.
  6. ^ "Planova: Uy". Asahi-kasei.co.jp. 2010-07-29. Olingan 2010-11-23.
  7. ^ "Viresolve Process Area Module". Milliypore. Olingan 2010-11-23.
  8. ^ "Sartorius AG Microsites: Virosart". microsite.sartorius.com. Olingan 2016-05-24.
  9. ^ "Nyu-York qon markazi". Nybloodcenter.org. Olingan 2010-11-23.
  10. ^ Ruan PH va boshq., "Riboflavin va nur yordamida trombotsitlar kontsentratlaridagi tanlangan viruslar va bakteriyalarni fotokimyoviy faolsizlantirish". Transfüzyon 2004 yil; 44: 877-885.
  11. ^ de Cock va boshq., "Mirasolni baholash dasturi: muntazam klinik amaliyotda trombotsitlar uchun Mirasol PRT dan foydalanish>" Transfüzyon 2008: 48 (Qo'shimcha): 156A
  12. ^ Goodrich RP va boshq., 5-bob: "Riboflavin va nurning antiviral va antibakterial xususiyatlari: qon xavfsizligi va transfuzion tibbiyot uchun qo'llanmalar". Flavinlar: Fotokimyo va fotobiologiya, jild. 6, 2006 yil, Qirollik kimyo jamiyati; Kembrij, Buyuk Britaniya. E Silva va AM Edvards, muharrirlar.
  13. ^ Kumar V va boshq., "Riboflavin va ultrabinafsha nurlari asosida patogenni kamaytirish: molekulyar darajadagi DNK zararlanishining darajasi va natijasi". Fotokimyo va fotobiologiya 2004; 80: 15-21.
  14. ^ Goodrich, RP va boshq., "Qon quyilgan komponentlar uchun" etarli "patogenni kamaytirish ko'rsatkichini aniqlash". Transfüzyon 2010 nashrga qabul qilindi
  15. ^ Viruslarni tekshirishni o'rganish bo'yicha ko'rsatma uchun eslatma: Viruslarni faollashtirish va yo'q qilishni tasdiqlovchi tadqiqotlarning dizayni, ulushi va talqini, EMEA CPMP BWP, 268/95 1996
  16. ^ "Prefiltratsiya yordamida virusli filtr ishini optimallashtirish". Milliypore. Olingan 2010-11-23.